Описание
Набор реактивов ОТ M-MuLV –RH представляет собой полную систему для эффективного синтеза первой цепи кДНК с мРНК или суммарной РНК матриц. M-MuLV –RH – генетически модифицированная обратная транскриптаза (ревертаза) вируса лейкемии мышей (M-MuLV). Она отличается от M-MuLV дикого типа структурой, каталитическими свойствами и температурным оптимумом активности. Фермент проявляет РНК- и ДНК-зависимую полимеразную активность, но лишен активности РНКазы Н. M-MuLV –RH ревертаза проявляет оптимальную активность при 42 °С (активна до 50 °С). Фермент способен синтезировать первую цепь кДНК длиной до 7 т.о. и включать модифицированные основания.
Набор содержит два типа буфера на основе KCl и (NH4)2SO4, оптимизированных для проведения эффективной реакции обратной транскрипции с любых матриц РНК, в том числе содержащих участки повышенной сложности (сильно структурированные или GC-богатые).
Входящие в набор олиго(dT)16 праймер и случайный гексапраймер позволяют более нацеленно подходить к обратной транскрипции интересующих типов или участков РНК. Случайный гексапраймер неспецифически связывается с РНК матрицей и используется для синтеза кДНК со всех типов РНК в суммарной РНК. Олиго(dT)16 праймер селективно отжигается на 3’-поли(А) концах РНК, обеспечивая синтез кДНК только с мРНК, содержащих поли(А) конец.
