Описание
Обратная транскриптаза Mint (Mint ревертаза) — РНК-зависимая ДНК полимераза, предназначенная для синтеза первой цепи кДНК с одноцепочечной РНК матрицы. Особенностью Mint-ревертазы является ее способность после завершения синтеза молекулы кДНК нематрично присоединять к ее 3′-концу 3-5 дезоксинуклеотидов (преимущественно C), что позволяет использовать ее для синтеза полноразмерных библиотек кДНК и клонирования 5′-концов кДНК (5′-RACE).
Основные свойства Mint ревертазы:
1. Лишена РНКазной активности
2. Обладает повышенной термической стабильностью (42-45°С)
3. Обеспечивает высокий выход кДНК
4. Обладает высокой процессивностью (синтезирует кДНК длиной до 7.5 т.п.о.)
Mint ревертаза входит в состав наборов реактивов Mint (кат.# SK001) и Mint-2 (кат.# SK005), предназначенных для приготовления двухцепочечной амплифицированной кДНК, обогащенной полноразмерными последовательностями, на основе тотальной или полиА+ РНК.
Наборы Mint и Mint-2 основаны на методе синтеза кДНК со сменой матрицы (SMART) . Получаемая кДНК обогащена полноразмерными последовательностями и содержит известные последовательности адаптеров на обоих концах. Процедура синтеза занимает 6-8 часов. Минимальное стартовое количество РНК для синтеза первой цепи кДНК составляет 250 нг тотальной или 100 нг полиА+ РНК. Для достижения наилучшего результата рекомендуется использовать 1- 2 мкг тотальной РНК или 0,5-1 мкг полиА+ РНК.
кДНК, полученная с помощью набора Mint, может быть использована для приготовления ненаправленных библиотек кДНК, супрессионной вычитающей гибридизации (SSH), нормализации с помощью набора реактивов Trimmer-2 , быстрой амплификации 3′- и 5′-концевых фрагментов полноразмерных транскриптов (RACE) и других приложений.
