Описание
БиоМастер ОТ-ПЦР–Премиум (2×) ×) предназначен для обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) с длинных (до 7 kb) и сложных матриц одношаговым методом. Набор содержит 2× буфер для ОТ-ПЦР–Премиум, содержащий все необходимые компоненты (за исключением ферментов, РНК матрицы и праймеров); смесь ферментов БиоМастер-Премиум-микс, воду, обработанную ДЭПК, ДМСО и буфер для нанесения (6×).
В состав БиоМастер-Премиум-микс входит M-MuLV –RH, HS—Taq ДНК-полимераза и Pfu ДНК-полимераза в оптимальном соотношении для протекания обеих реакций.
M-MuLV –RH – генетически модифицированная обратная транскриптаза (ревертаза) вируса лейкемии мышей (M-MuLV). Фермент проявляет РНК- и ДНК-зависимую полимеразную активность, но лишен активности РНКазы Н. Ревертаза M-MuLV –RH обладает повышенной термостойкостью и проявляет активность до 50 °С.
Высокоточную ПЦР осуществляет комбинация из двух высокоочищенных ферментов: высокопроцессивной рекомбинантной HS—Taq ДНК-полимеразы и Pfu ДНК-полимеразы с корректирующей активностью. Смесь полимераз неактивна при комнатной температуре. Для активации ферментов необходим прогрев реакционной смеси при 92-93 °С в течение 5 мин.
Сочетание полимераз позволило повысить точность и надежность амплификации в несколько раз по сравнению с Taq ДНК-полимеразой. Совместное использование двух ферментов дает возможность нарабатывать ПЦР-продукты до 7 т.п.о. Продукты, полученные с помощью БиоМастер ОТ-ПЦР–Премиум (2×), преимущественно содержат 3’-dA концы, что может быть использовано при клонировании.
Буфер оптимизирован для эффективного протекания как ОТ, так и ПЦР.
