Описание
Дуплекс-специфическая нуклеаза (ДСН) очищена из гепатопанкреаса камчатского краба с помощью модифицированного протокола, описанного Шагиным и соавт. (Shagin et al., 2002). ДСН – термостабильная нуклеаза, обладающая специфичностью к двухцепочечной (дц) ДНК. ДСН проявляет гидролитическую активность в присутствии ионов двухвалентных металлов (например, Mg2+). ДСН может быть использована для удаления двухцепочечной ДНК из сложных смесей нуклеиновых кислот, например при нормализации образцов кДНК или при определении длины выступающих теломерных концов.
Измерение активности: Активность ДСН измеряют с помощью модифицированного метода Куница (Kunitz, 1950), где за единицу активности принимают количество фермента, которое при добавлении к 50 мкг/мл ДНК из тимуса теленка приводит к увеличению абсорбции раствора на 0.001 единицу за минуту. Измерение активности проводят при 25 °C в 50 мМ Tris-HCl буфере (pH 7.15), содержащем 5 мМ MgCl2.
Основные свойства ДСН:
1. Mg2+-зависимая нуклеаза, необходимая концентрация ионов магния для большинства приложений – 5 мМ. Ингибируется в присутствии ЭДТА.
2. Субстратная специфичность: ДНК в ДНК-ДНК (минимальная длина спаренной последовательности субстрата – 9-10 п.н.) и ДНК-РНК гибридах (минимальная длина спаренной последовательности субстрата – 15-20 п.н.)
3. Температурный оптимум: 55-65 °С
4. pH оптимум: 7-8
5. pH стабильность: от 4 до 12
6. Устойчива к обработке протеиназой К при 37 °С
7. Температурная стабильность:
Состав набора:
Лиофилизированная дуплекс-специфическая нуклеаза (ДСН), 100 ед. Куница
Буфер для хранения ДСН, 120 мкл
10Х ДСН буфер, 200 мкл
ДСН стоп-раствор, 1000 мкл
Контрольная плазмидная ДНК (0,1 мкг/мл), 20 мкл
